?說到海藻糖的應用，那真的是不勝枚舉，在上一期的文章里AVT小編給小伙伴們介紹了海藻糖在冷凍卵母細胞中如何發揮功效，圍繞這一話題，本期小編帶來海藻糖在體細胞、精子細胞冷凍保護中的應用。

?對冷凍保護劑的研究一直未間斷過。冷凍保護劑是一種合理的鹽類緩沖液,似乎可減少高鹽對細胞的損害。冷凍保護劑包括:滲透性保護劑,如丙二醇(propanediol ,PROH)、乙二醇(ethylene glycol，EG)、二甲亞砜( dimethyl sulfoxide , DMSO)等;非滲透性保護劑,如蔗糖、海藻糖、聚乙二醇等。聯合使用玻璃化冷凍保護劑可降低毒性，提高保護作用。適宜的冷凍保護液是目前玻璃化冷凍卵母細胞的焦點，而海藻糖在此方面表現出明顯優勢并逐漸得到重視。

?卵母細胞冷凍成為一種必不可少的輔助生殖技術，可以繞過一些道德、倫理和宗教等在冷凍胚胎方面的限制。 但目前卵母細胞的冷凍技術尚不完善，尚處于嘗試摸索階段。

?海藻糖在體細胞、精子細胞冷凍保護中有著哪些應用呢？

?Satpathy等[1]利用胞外高濃度的海藻糖在37℃孵育7h的方法,使--部分海藻糖滲透到紅細胞內。胞內的海藻糖能夠充分發揮其在細胞膜內的滲透保護作用，而且在孵育后的紅細胞內三磷酸腺苷(ATP)及2,3-二磷酸甘油酸(2 ,3-DPG)的水平和新鮮紅細胞內的含量一樣。海藻糖已被作為一種很重要的滲透壓保護劑。中國莊遠等利用海藻糖凍干紅1isI細胞,分別采用4C,22°C和37°C的溫度,海藻糖濃度分別為0,200 ,400 ,600, 800和1 000 mmol/L,不同的孵育時間2,4,6,8和10h。最終發現最適合的海藻糖載入紅細胞的方法是在胞外濃度為800mmol/L,379C中孵育8h。海藻糖能夠到達細胞內的濃度有利于紅細胞的保存。Pietramaggiori 等[7]研究在37°孵育2h的條件下利用血小板的胞吞作用使海藻糖載入到血小板內部，利用5%小牛血清蛋白和50 mmol/L的海藻糖進行凍干，復水后有85%的血小板存活,其功能與對照組沒有差異。說明海藻糖在凍干過程中可有效保護血小板。

?Tang等[2]在37°C將血小板孵育在40mmol/L的海藻糖內4h后行凍干，結果孵育后血小板內pH值與新鮮組相同，且孵育后血小板內pH值在復水的4h內沒有變化，說明海藻糖有穩定血小板作用。

?He等[3]利用gao效液相色譜法研究胞外0.4 mol/L海藻糖在39°C,10min的介導下載入到小鼠肝細胞內的海藻糖濃度為0.07mol/L,細胞存活率達到90%,而時間延長至1~2h胞內海藻糖濃度達到0.17 mol/L,但成活率僅72%。

?Katenz 等[4]研究發現,0.2 mol/L的海藻糖和10%DMSO聯合冷凍肝細胞,與對照組相比海藻糖組明顯增加成活率。

?He等[5]利用石英毛細微管作為冷凍載體,2mol/LPROH和0.5mol/L海藻糖用玻璃化冷凍小鼠胚胎干細胞得到細胞成活率和未冷凍的對照組相似,并且細胞在增殖及功能_上無明顯差異。

?Rodrigues等[6]進行臍血干細胞的.冷凍保存研究，采用30mmol/L的海藻糖和2.5%DMSO進行冷凍，觀察細胞存活率、CD45+CD34+細胞表達率以及干細胞的發育潛能。結果發現:利用低濃度的DMSO合并二糖作為冷凍保護劑可以提高臍血干細胞移植的安全性,并可以減少患者的不良反應的發生。

?McGinnis等[7]在4C和22°C分別用含海藻糖的凍干液干燥保存小鼠精子,精子復水后進行胞漿內單精子注射(ICSI),與不含海藻糖的凍干液相比，含海藻糖的凍干液保存的精子的囊胚發育率明顯增高。表明海藻糖在凍干精子的過程中對小鼠精子的發育潛能有很大的保護作用。

?Hu等[8]在用海藻糖冷凍保存豬精子的研究中,利用胞外濃度為0,25,50, 100和200 mmol/L,摸索適合的冷凍海藻糖濃度,100mmol/L的海藻糖冷凍的精子活動率為49.89%,頂體完整性為66.52%,膜完整性為44.61%，而濃度增加到200mmol/L時上述檢測指標均下降。

?海藻糖在體細胞、精子細胞冷凍保護中的應用，AVT為您帶來品質高注射級海藻糖。

?參考文獻

[1] Satpathy GR, Torok Z, Bali R, et al. Loading red blood cells with trehalose: a step towards

[2]biostabilization[J]. Cryobiology, 2004, 49(2): 123-136.

Pietramaggiori G, Kaipainen A, Ho D, et al.Trehalose lyophilized platelets for wound healing [J].W ound Repair Regen, 2007, 15(2): 213-220.

[3] Tang M, Wolkers WF, Crowe JH, et al. Freeze- dried rehydrated human blood platelets regulate intracellular pH [J ] . Transfusion,2006, 46(6): 1029-1037.

[4] He XM, Amin AA, Fowler A, et al. Thermally induced introduction of trehalose into primary rat hepatocytes [J]. Cell Preservation Technology, 2006, 4(3): 178-187.

[5] Katenz E, Vondran FW, Schwartlander R, et al. Cryopreservation of primary human hepatocytes: the benefit of trehalose as an additional cryoprotective agent[J]. Liver Transpl, 2007, 13(1): 38-45.

[6] He X, Park EY, Fowler A, et al. Vitrification by ultra-fast cooling at a low concentration of cryoprotectants in a quartz micro-capillary: a study using murine embryonic stem cells[J]. Cryobiology, 2008, 56(3): 223-232.

[7] Rodrigues JP, Paraguassu- Braga FH, Carvalho L, et al. Evaluation of trehalose and sucrose as cryoprotectants for hematopoietic stemcells of umbilical cord blood [J]. Cryobiology, 2008, 56 (2): 144-151.

[8] McGinnis LK, Zhu L, Lawitts JA, et al. Mouse sperm desiccated and stored in trehalose medium without freezing[J]. Biol Reprod, 2005,73(4): 627-633.

[9] Hu JH, Li QW, Li G, et al. The cryoprotective effect of trehalose supplementation on boar spermatozoa quality[J]. Anim Reprod Sci, .2009, 112(1-2): 107-118.

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